熒光分光光度計(jì)在使用時(shí)，需要注意開機(jī)次序，以保護(hù)設(shè)備之間不受影響。熒光光譜儀開機(jī)順序一般為先開氙燈，然后開儀器主機(jī)，后開跟儀器連接的計(jì)算機(jī)。如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點(diǎn)亮，為了避免瞬問脈沖電流對(duì)周圍設(shè)備造成影響，需要先開氙燈，等電流穩(wěn)定后再打開周邊的電腦等設(shè)備。關(guān)機(jī)順序則相反。 熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按試樣相同方法處理后，配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度和空白溶液的相對(duì)熒光強(qiáng)度；扣除空白值后，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線；然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度，扣除空白值后，從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
如何選擇熒光分光光度計(jì)的濾光片？
在進(jìn)行發(fā)射圖譜掃描分析時(shí)，根據(jù)斯托克斯定律，設(shè)置的激發(fā)波長要比發(fā)射波長短，例如，激發(fā)波長λex=260nm，則發(fā)射起始波長應(yīng)該從大于260nm的波長開始，比如270nm，發(fā)射結(jié)束波長為870nm。這樣一來，在激發(fā)光的2倍波長(520nm)、3倍波長(780nm)處都會(huì)出現(xiàn)激發(fā)波長的尖銳的倍頻峰，若與熒光光譜峰重疊，將會(huì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生干擾，需選用合適的濾光片將其濾掉。
倍頻峰就是激發(fā)光的散射峰，雖然波長掃描到雙倍波長的時(shí)候出現(xiàn)，但實(shí)際波長卻是激發(fā)波長，可以通過增加高通濾光片來去除倍頻峰。高通濾光片一般放在發(fā)射處，片上都標(biāo)明其可以濾除的大波長。也就是說，體系中增加高通濾光片后，比其上所標(biāo)波長低的光，也包括這些光的二倍波長光、三倍波長光，會(huì)被濾掉；而比其所標(biāo)波長高的光則可以順利通過。
