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熒光分光光度計(jì)測(cè)試的注意事項(xiàng)有哪些

發(fā)布日期: 2020-05-25
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  熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,有濾光片熒光計(jì)、濾光片-單色器熒光計(jì)等,通常均由以下四個(gè)部分組成:激發(fā)光源、用于選擇激發(fā)光波長和熒光波長的單色器、樣品池及測(cè)量熒光的檢測(cè)器。熒光強(qiáng)度容易受外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會(huì)造成熒光強(qiáng)度的變化。嚴(yán)格控制測(cè)試條件對(duì)熒光分析來說至關(guān)重要。
 ?、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
  ②在熒光分析時(shí),為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。
 ?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴?qiáng)度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,測(cè)試溫度變化不超過±3℃,對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無影響。
  ④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色熒光,在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍(lán)光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強(qiáng)度大,而在pH=11時(shí)熒光消失;但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會(huì)生成熒光強(qiáng)度比維生素B2強(qiáng)得多的黃光素,并可溶于lv仿。利用此性質(zhì)可提高測(cè)定的靈敏度和選擇性。
 ?、莘肿咏Y(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,熒光效率顯著增強(qiáng)。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度。
  ⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光,應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同,拉曼散射與激發(fā)光波長不同,而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān),因此可以通過選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測(cè)試時(shí)選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對(duì)散射光的影響進(jìn)行校正。
 ?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)中必須除02。
  ⑧測(cè)試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對(duì)眼睛造成損傷。
 ?、醿x器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng),避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。
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