熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器，有濾光片熒光計、濾光片-單色器熒光計等，通常均由以下四個部分組成：激發(fā)光源、用于選擇激發(fā)光波長和熒光波長的單色器、樣品池及測量熒光的檢測器。熒光強度容易受外界因素的影響，如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來說至關(guān)重要。
?、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
?、谠跓晒夥治鰰r，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預(yù)熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結(jié)果幾乎無影響。
?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例：在pH=7～12的溶液中會產(chǎn)生藍色熒光，在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如，維生素B2（核黃素）在430～440nm藍光照射下會發(fā)出綠色熒光，λem為535nm。它在pH=6～7的溶液中熒光強度大，而在pH=11時熒光消失；但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素，并可溶于lv仿。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。
?、莘肿咏Y(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
?、奕鹄⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光，應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同，拉曼散射與激發(fā)光波長不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān)，因此可以通過選擇適當?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進行校正。
?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低，常見的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象，因此，在較嚴格的熒光實驗中必須除02。
⑧測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防對眼睛造成損傷。
?、醿x器房應(yīng)注意經(jīng)常通風，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。
